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發布時間:2022-08-16 22:17:03 作者:知網小編 來源:m.elxoepd.cn
RT-PCR技術靈敏而且用途廣泛,可用檢測細胞、組織中基因表達水平,細胞中RNA病毒的含量和直接克隆特點基因的cDNA序列等。 如果用于定量檢測,就是上文提到的qPCR, 此次新冠病毒核酸檢測熒光PCR技術,就是基于此。
新冠疾病作為一種高傳染性疾病,對其病原體的檢測是診療病人的關鍵。 目前檢測傳染病的策略包括兩點,檢測病原體本身,或檢測人體為了抵抗病原體而產生的抗體,也就是病原學檢測和血清學檢測。 例如,在冠狀病毒中,針對其刺突糖蛋白,包膜蛋白和核衣殼蛋白的檢測,就屬于病原學檢測中的抗原檢測;而針對其基因組RNA的檢測則是病原學中的核酸檢測。 病毒入侵人體,一般會激活機體的特異性免疫,產生抗體進行抵御,針對這些特異抗體的檢測則屬于血清學檢測。 這里我們從分子生物學的角度,將上述檢測類型重新分成核酸檢測和蛋白檢測(表1)。 不過這里要注意的是,抗原不一定都是抗體,細菌上的脂多糖LPS就不是蛋白。 檢測方法上,我們將介紹qPCR、等溫擴增和基于CRISPR的三種核酸檢測技術。
基于抗體與抗原的特異性識別反應,目前已經開放了一系列免疫檢測方法,最常見的如Western blot;臨床上則多采用膠體金檢測試紙。 目前已經有針對新型冠狀病毒特異IgM和IgG的檢測試紙,用于進一步確認病人的感染情況。
目前針對新型冠狀病毒的檢測主要是采用的是qPCR (Real time quantitative PCR, 實時熒光定量PCR)中的Taqman水解探針法。 2020年1月21日,中國疾控中心提供的用于新型冠狀病毒核酸檢測的引物和探針序列(圖3)。